Atividade de Extração de DNA

Sodré GB Neto

O estudo do DNA desempenha um papel fundamental em diversas áreas da bioengenharia, fornecendo insights valiosos que impulsionam o desenvolvimento de novas tecnologias e aplicações. Abaixo estão alguns aspectos importantes sobre a importância do estudo do DNA em bioengenharia:

Engenharia Genética e Terapia Gênica:
- O conhecimento detalhado do DNA permite aos engenheiros genéticos modificar genes para fazer ligeiras modificações nos organismos com características desejadas.
- Na terapia gênica, o estudo do DNA é crucial para desenvolver tratamentos que corrijam defeitos genéticos em humanos, oferecendo novas abordagens para tratar doenças genéticas.
Bioprocessos e Biotecnologia:
- O estudo do DNA é essencial para melhorar a produção de biomoléculas de interesse industrial, como enzimas, proteínas terapêuticas e biocombustíveis.
- A bioengenharia utiliza o DNA para otimizar processos biotecnológicos, como fermentação, produção de medicamentos e desenvolvimento de culturas celulares.
Agricultura e Biotecnologia de Plantas:
- O estudo do DNA de plantas é crucial para o desenvolvimento de culturas geneticamente modificadas (transgênicas) com características melhoradas, como resistência a pragas e doenças, tolerância a estresses ambientais e maior teor nutricional.
- A bioengenharia utiliza técnicas de edição de genes para desenvolver plantas com características agronômicas desejáveis, contribuindo para a segurança alimentar e a sustentabilidade agrícola.
Ecologia e Conservação:
- O estudo do DNA é fundamental para entender a diversidade genética de populações e espécies, auxiliando na conservação da biodiversidade e na gestão de recursos naturais.
- A bioengenharia emprega técnicas de biologia molecular para monitorar populações, identificar espécies ameaçadas e desenvolver estratégias de conservação baseadas em dados genéticos.
Medicina Personalizada e Diagnóstico Molecular:
- O estudo do DNA é essencial para a medicina personalizada, permitindo a identificação de variações genéticas que influenciam a predisposição a doenças, a resposta a tratamentos e a prevenção de efeitos adversos.
- A bioengenharia utiliza o sequenciamento do DNA e outras técnicas moleculares para diagnosticar doenças genéticas, monitorar o progresso da doença e personalizar tratamentos para cada paciente.

Em resumo, o estudo do DNA desempenha um papel crucial na bioengenharia, impulsionando avanços em diversas áreas, desde a produção industrial até a medicina personalizada. O entendimento e a manipulação do DNA oferecem oportunidades sem precedentes para inovação e melhorias significativas na saúde, na agricultura, no meio ambiente e em muitos outros campos.

Na experiência de Extração de DNA utilizando os materiais mencionados, é importante compreender os detalhes do processo e a origem do DNA extraído, além de considerar a relevância do álcool absoluto no procedimento e a visualização do DNA após a adição do álcool etílico.

Para extração de DNA usando os MATERIAIS:

1. Béquer

2. Pipeta Pasteur de plástico

3. Bases de vidro

AMOSTRA E REAGENTES

1. NaCl (cloreto de sódio)
2. Detergente Líquido Desengordurante, (que quebra os lipídios que formam a membrana celular liberando o núcleo)
3. Álcool Absoluto

PROCEDIMENTO

Faça um bochecho com água salgada ( o sal serve para competir com a água impedindo-a de diluir o DNA) , coloque-o em um béquer e, em seguida, despeje-o em uma base de vidro limpa, presente na bancada. Em seguida, adicione ao béquer uma quantidade de álcool. No recipiente contendo álcool, adicione 3 gotas de corante azul (no caso usamos azul de trypan). Verta lentamente pela parede do béquer mudando o aspecto da solução local sobre o seu bochecho e observe a mudança de aspecto da solução

Aspecto observado após a adição do álcool:
- O aspecto observado foi a separação da solução em duas fases distintas. A fase superior geralmente apresenta uma coloração mais clara, enquanto a fase inferior permanece mais opaca. O DNA, sendo insolúvel no álcool, precipita-se na fase superior, formando uma película visível.
Origem do DNA extraído:
- O DNA extraído provém do bochecho feito pelo indivíduo. Este bochecho contém células da orofaringe, parte das quais são células epiteliais da mucosa oral e parte são da microbiota bucal. A microbiota bucal é composta por uma diversidade de microrganismos, incluindo bactérias, fungos e placas bacterianas (tártaro). Em média, a boca humana contém Boca: Cerca de 500 a 700 espécies diferentes.milhares de cepas diferentes de bactérias.
Papel do álcool absoluto no processo de extração:
- O álcool absoluto desempenha um papel crucial na extração de DNA. Ele é utilizado para precipitar o DNA, ou seja, para fazer com que o DNA saia da solução aquosa e forme uma fase separada. Isso ocorre porque o DNA é insolúvel em álcool. Portanto, ao adicionar álcool absoluto à solução contendo DNA, o DNA precipita-se, formando uma película ou flocos visíveis. Quando o álcool é adicionado à solução contendo DNA em uma etapa posterior à lise celular e à digestão das proteínas, ele cria um ambiente onde o DNA se torna insolúvel e forma flocos visíveis. Essa precipitação ocorre porque o álcool, sendo menos polar que a água, diminui a solubilidade do DNA na solução, fazendo com que o DNA se agrupe e se separe da solução aquosa.

Outros Reagentes:

Cloreto de sódio: O sal serve para competir com a água impedindo-a de diluir o DNA. Utilizado na solução salina para auxiliar na ruptura das membranas celulares e na liberação do DNA. Na extração de DNA, a solução salina desempenha um papel crucial na ruptura das membranas celulares e na liberação do DNA das células. Esta solução salina, geralmente composta de cloreto de sódio (NaCl) em água, cria um ambiente hipotônico em relação ao meio intracelular das células que estão sendo lisadas. Existem duas principais funções da solução salina na extração de DNA:
Auxílio na Ruptura das Membranas Celulares: A presença de íons na solução salina ajuda a desestabilizar as membranas celulares, facilitando sua ruptura. Os íons presentes na solução salina interagem com os fosfolipídios que compõem as membranas celulares, alterando sua estrutura e tornando-as mais permeáveis. Isso permite que o detergente presente na solução de lise penetre nas células e dissolva as membranas, liberando o conteúdo intracelular, incluindo o DNA.
Competição por Íons com a Água: Além disso, a solução salina também compete com a água por íons, criando um ambiente onde a água tende a se mover para o meio extracelular, causando um efeito osmótico. Isso pode contribuir para a lise das células, já que a pressão osmótica pode aumentar dentro das células, levando à ruptura das membranas celulares e à liberação do DNA. Portanto, a solução salina na extração de DNA não apenas impede a diluição do DNA competindo por íons com a água, mas também desempenha um papel fundamental na ruptura das membranas celulares, facilitando a liberação do DNA das células.
Álcool etílico: Utilizado para precipitar (pra cima) , ou melhor, irromper pra cima, o DNA da solução aquosa.

Visualização do DNA após a adição de álcool etílico:
- É possível visualizar o DNA após a adição de álcool etílico porque o álcool etílico precipita o DNA da solução aquosa. Como resultado, o DNA forma uma fase visível, separada da solução, podendo ser observado a olho nu ou com o auxílio de um microscópio.
Aspectos sobre a importância do estado do DNA em bioengenharia:
- O estado do DNA é de extrema importância em bioengenharia, pois influencia diretamente a capacidade de manipulação e modificação genética de organismos. O conhecimento sobre a estrutura, integridade e pureza do DNA é fundamental para o desenvolvimento de técnicas de clonagem, terapia genética, engenharia genética de plantas e animais, entre outras aplicações. Além disso, o estado do DNA afeta a eficácia e a precisão das técnicas de sequenciamento genético, que são essenciais para o estudo da genômica e da biologia molecular. Assim, garantir a integridade e a qualidade do DNA é essencial para o sucesso de projetos de bioengenharia.